本发明公开了一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法,包括下述步骤:原料处理、高压微射流超微粉碎处理超临界CO2。流体萃取,收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用50-60%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V。具有含量高,工艺简单,适合生产,生产成本低等优点。